准确、及时地诊断阿尔茨海默病(AD)对于改善患者护理和支持新治疗方法的临床试验至关重要，而且随着疾病修饰疗法的引入，特别是淀粉样蛋白靶向免疫疗法的引入，AD的诊断也将变得尤为重要。基于临床评估，神经心理测试和脑成像，AD的诊断通常是排除性的。然而，AD的临床诊断并不理想，其准确率取决于所使用的临床/神经病理学标准。此外，混合病理在临床阿尔茨海默氏病型痴呆中很常见。

一项旨在于建立一种标准化、常规使用的用于测量脑脊液(CSF)中的阿尔茨海默病(AD)生物标志物的前分析方案因此建立。

脑脊液(CSF)淀粉样蛋白(Aβ)肽Aβ1-42和Aβ1-40的生物标志物，磷酸化tau (181P;P-tau)和total-tau (T-tau)可能提高AD早期诊断的准确性，支持将其纳入常规临床实践的证据正在积累。根据正电子发射断层扫描，生物标志物P-tau/Aβ1-42和T-tau/Aβ1-42与淀粉样蛋白状态高度一致，并预测了未来AD的临床进展。因此，在AD诊断中适当使用腰椎穿刺(LP)和脑脊液检测的标准已经被提出，并被纳入AD的研究诊断指南。

AD CSF生物标志物的测量可能会受到分析前因素(如样品处理/储存)的影响，而这些因素在不同的临床部位可能有所不同。Aβ1-42的水平特别受前分析因素的影响，因为肽容易聚集和表面结合;因此，使用聚丙烯管收集是很重要的，因为Aβ1-42会附着在其他类型的管上。一种新的2.5 mL低结合假底管(FBT;Sarstedt)是以解决这个问题的基础上在最近开发的。

在评估分析前因素的影响时，选择正确的参考标准非常重要，最好包括低结合试管中未处理的新鲜CSF样本(从未冷冻过)。然而，该方法仅在一项研究中得到系统应用。此外，应该使用高度可靠的方法来测量生物标志物的浓度，例如Elecsys CSF免疫分析法(罗氏诊断)，以便评估分析前因素的微妙影响。使用冷冻CSF样本和/或方法学中不太可靠的生物标志物检测的研究不太可能检测出分析前变量的所有影响。

本实验样本来源于瑞典马尔默斯科恩大学医院临床实践中接受诊断性LP的患者(N=35例患者)，实验使用的是新鲜采集的脑脊液样本(从未冷冻过)。纳入标准包括给予知情同意和能够成功收集≥40 mL CSF。新鲜的脑脊液样本被用来更好地模拟常规临床实践，并直接收集到一种新型的低结合FBT中，该FBT适用于多个平台。脑脊液使用附加式腰椎液体压力计(LFM)收集。样品在采集后4-6小时内进行分析。

本实验需测量脑脊液中Aβ1-42、Aβ1-40、P-tau和T-tau蛋白浓度，其测定采用欧洲Conformite Europeen批准的Elecsys CSF检测(冷冻脑脊液样本)，或使用Elecsysβ-淀粉样蛋白(1-42)CSF、Elecsysβ‐淀粉样蛋白(1-40)CSF、Elecsys Phospho-tau (181P) CSF和Elecsys Total-tau CSF免疫检测(新鲜脑脊液;所有标记物目前正在开发中)在cobas e 601分析仪(罗氏诊断)上。

所有样本(无论制备方法)在测试前随机化。统计人员对每个样本的收集方法并不盲目，但所有样本都进行了相同的分析，而不考虑分析前的方案，主要结果由独立的统计程序验证。在每个个体中进行了预分析因子之间的比较。

使用先前冷冻的样品评估管的类型/灭菌。除试管类型/灭菌实验外，所有实验均使用低结合型假底试管(FBT, Sarstedt)。使用Elecsys CSF测定生物标志物。

样品在室温和2°C至8°C下储存，管中灌装容积为1.5 mL和3ml，评估运输/储存条件:垂直运输和直接测量(样品采集后4-6小时); 直立运输、直立存放40小时后测量;倒装40小时后垂直运输及测量;经40小时的辊混后垂直运输和测量; 水平运输和直接测量;水平运输和水平储存24小时后测量;水平运输和水平储存40小时后测量。

在垂直和水平运输并在室温和2℃至8℃保存的样品中，评估使用不同的管填充量2.25至3ml(增量:0.25 mL)的效果。

结论：β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42水平因管型而异，使用低结合FBT降低变异。无混炼的Aβ1-42水平比倒置混炼的高。Aβ1-42水平运输比垂直运输低; 这个问题通过在2℃至8℃的最大温度下填充和存储来解决。Aβ1-40水平受影响较小。磷蛋白和总蛋白水平基本未受影响。

医博士编译自：Hansson O, Rutz S, Zetterberg H, et al. Pre‐analytical protocol for measuring Alzheimer's disease biomarkers in fresh CSF. Alzheimers & Dementia. 2020; 12(1):e12137. doi:10.1002/dad2.12137.

来源：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33354617/